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    Smart-seq2单细胞转录组测序

    • 产品简介
    • 样本要求
    • FAQ

    单细胞转录组测序 （Single Cell RNA Sequencing）是在单细胞水平对mRNA进行全转录组扩增及高通量测序的一种技术，研究单个细胞内的整体基因表达情况，以及基因的结构变异，主要用于细胞分子机制中细胞异质性研究、以及样本量少而无法进行常规高通量测序等。

    产品优势
    • 扩增技术
      SMART-seq2技术能够满足高敏感度、无偏好性的cDNA转录本的扩增，也能够富集完整全长的转录本，并且可以维持原始mRNA各转录本的丰度。
    • 分析内容
      以基因表达水平和基因结构水平分析为两大支柱；其他包括转录因子的注释和细胞亚型分类等模块；可以根据客户具体需求给予个性化分析服务及多组学关联分析。
    • 合作文章成果
      Science、Nature、Cell、lmmunity、Nature Communications等多篇文章。
    • 项目经验和物种经验
      丰富的项目经验，测序物种包含多种动植物。
             
     送样要求
    细胞分离由合作方完成单细胞分离
    样品类型活体新鲜完整细胞，不适于经固定、染色等处理的样本
    样品体积在显微镜或其他设备辅助下分离，得到的单细胞样本体积以不高于1μl为宜
    送样量建议重复单细胞样本个数不小于5个
    其它要求直接使用公司给予的0.2 ml平盖PCR管作为采集管，管盖标注编号；细胞样本需采用缓冲液洗涤；裂解液避免反复冻融，注意避免起泡
    操作过程中请尽量将采样管置于低温环境下（如冰上）。样本采集管需要用Parafilm封口膜缠绕封口，装入PCR管盒，橡皮筋固定，再装入自封袋，-80℃暂存，大体积干冰运输；防止液体状态下管身颠倒使细胞附于采样管内壁上部
    送样量：单细胞转录组扩增，建议重复单细胞样本个数不小于5个
    细胞采样后，请置于96孔管盒中，避免采样管倾倒，尽快寄送，若需保存请置于-80℃
       
    • 常见的单细胞分选方法及优缺点?
      A：
      1）有限稀释法
      优点：操作简便，无需特殊仪器设备，成本低；
      缺点：对于浓度的计算易存在误差，基于泊松分布原理，即使在理想状态下，取得单细胞效率在20-30%左右，假阳性率高。               
      2）显微操作法（口吸管）
      优点：操作简单，价格低廉，适用于少量的单细胞挑选；
      缺点：不能通量操作，有人为因素干扰，需要技术熟练，存在降解风险。                       
      3）流式细胞仪分选（BD FACSAria系统）
      优点：可以分选特定抗体标记的细胞类型,细胞活性较好，可通量操作；
      缺点：分选单细胞效率不高，50%能扩增成功。
      4）微流控（Fluidigm /Cl系统）
      优点：适用于均一细胞系，通量高、分选扩增效率高；
      缺点：只能用于转录组，不能分选差异的细胞，而且采用的是SMARTer的扩增方式。
      5）激光显微切割（LCM）
      优点：适用于组织样本，分选效率高，特异性好；
      缺点：操作复杂，需要固定染色等步骤，对核酸产生潜在的损害。